¡Hola a todos!

El aporte que quiero realizar hoy es sobre la secuenciación, una técnica de diagnóstico molecular. Me han consultado sobre este tema y como no lo tenía claro, me puse a investigar.

Aquí le comparto información que recuperé del blog de un reconocido laboratorio de análisis clínicos.

La secuenciación de ADN es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad es la determinación del orden de los nucleótidos (A, C, G y T) de los cuales está formada una cadena específica de ADN. La secuencia de ADN constituye la información genética heredable de un ser vivo.

El proceso de secuenciación más utilizado consiste en los siguientes pasos:

• Se preparan una mezcla que contiene cada uno de las nucleótidos (A,C,G y T) marcados con moléculas fluorescentes diferentes para cada uno, una enzima que une estos nucleótidos (ADN polimerasa), un iniciador o “primer”, que es una cadena pequeña de nucleótidos a partir de la cual la enzima va uniendo otros nucleótidos y un terminador de la reacción (nucleótidos modificados llamados nucleótidos dideoxi). Cada mezcla es una reacción independiente.

• Se agrega el ADN desnaturalizado (separado en cadenas simples), que nos interesa conocer, en la mezcla de reacción para que la ADN polimerasa lo utilice como molde y empiece a unir nucleótidos, produciendo así una serie de fragmentos de ADN de diferente longitud marcadas fluorescentemente.

• Los fragmentos de ADN sintetizados y marcados son separados por tamaño mediante electroforesis en un capilar con poliacrilamida. La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico. Esta movilidad depende del peso de la molécula. El tamaño de las moléculas se diferencia solamente por un nucleótido, y estas son detectadas por un láser dependiendo del nucleótido incorporado se detecta una emisión de luz a una longitud de onda diferente según el fluoróforo unido al nucleótido.

• La aparición de una señal de luz en una posición concreta del histograma nos indica que en ese punto de la secuencia del ADN está la base correspondiente al nucleótido marcado según la emisión de luz detectada para el fluoróforo unido al mismo.